初二细菌生物模型制作(急性肾盂肾炎(AP)大鼠模型的建模方法)
来源:细菌感染致急性肾盂肾炎
模式动物品系:SPF级SD大鼠,健康,6W,雄性,体重为180g-200g。
实验分组:实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期:4-6 weeks
建模方法:大鼠禁食12h后 3 %戊巴比妥钠按照40mg/kg剂量,腹腔注射麻醉后,动物仰卧固定手术台上,腹部皮肤消毒,铺无菌手术巾,下腹正中切口,长约2cm,逐层切开腹壁进入腹腔,在右侧后腹壁辨识右侧输尿管后,用4号缝合丝线从右侧输尿管中段两旁分别向腹后壁外侧穿针并引出缝合线,用动脉夹夹闭阴茎,用TB针向膀胱内缓慢注入OD 600 nm = 0. 35~0. 40的大肠杆菌菌液(Escherichia coli,ATCC 25922)0. 5 mL,然后拉紧腹壁外面的缝合线两端,使输尿管收缩至1/3,将缝合线拉至大鼠背部打结,逐层缝合腹壁切口,恢复饮水和供食,手术后24h,拆去腹壁外面输尿管结扎线,使输尿管重新开放。
于预定时间处死动物,取其两侧肾脏,小心去除肾包膜;然后纵向切开肾脏,一半匀浆后行细菌培养,另一半固定液中固定,作常规组织切片,HE染色,光镜下观察。同期膀胱穿刺作尿液细菌培养。
应用:疾病模型
模型评价:
细菌学检查:
吸取无菌尿液 20μl 涂布平板培养,24h 后刮取平板 1/4 菌落溶于25ml 生理盐水中,检测 600nm 吸光度,以生理盐水作为空白对照;
切取一侧肾组织200mg,加入10ml无菌水匀浆,吸取匀浆液100 μl置于培养皿中,培养基121℃高压蒸汽灭菌后冷却至50~60℃后倒入培养皿轻轻摇匀,于 37℃生化培养箱中培养24h,结果采用半定量方法进行评分,细菌计数>10000记为阳性,细菌计数<500记为阴性。
组织病理学:
HE染色:
取一侧肾组织,固定包埋后行石蜡切片,HE染色观察肾脏组织病理改变情况。
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